In der zugrundeliegenden Studie wurde die Wirkung eines 85%igen Ethanol-Extraktes aus getrockneten Blättern des Maulbeerbaums auf die Biosynthese von Melanin untersucht. Dieser Extrakt hemmte die Aktivität des Enzyms Tyrosinase, welches im Prozess der Biosynthese von Melanin DOPA zu Dopachrom umwandelt..
Das nach der Extraktion erhaltene Mulberrosid F (Moracin M-6, 39-di-O-bb-D-Gucopyranosid) zeigte in der Studie hemmende Wirkungen auf die Tyrosinase-Aktivität und auf die Melaninformation von Melan-A-Zellen. Mulberosid F erwies sich in der Studie außerdem als Freier-Radikalen-Fänger, eine Eigenschaft, die beim Schutz vor Auto-Oxidation eine Rolle spielt, indem sie anti-oxidativ wirkt. Die Ergebnisse der Studie zeigen, dass der Extrakt aus getrockneten Blättern des Maulbeerbaums als Mittel zur Hautaufhellung genutzt werden kann.
Untersuchung der Pilz-Tyrosinase
Ein mM der Testsubstanz wurde in MeOH : H2 O51 : 1.5ml L-Tyrosin (1.5 mM) aufgelöst. 40 ml L-Dopa (25mM), 80 ml 67 mM phosphatgepufferte Salzlösung (pH 6,8) und 40 ml der selben Pufferlösung beziehungsweise des Test-Samples wurden auf einer Mikrotiterplatte mit 96 Schächten aufgebracht und anschließend mit 80 ml Pilz-Tyrosinase (60U) gemischt. Nach einer dreißigminütigen Inkubation bei 37 °C wurde der Anteil an Dopachrom in der Reaktionsmischung bestimmt. Basierend auf einer optischen Dichte von 490 nm (OD 490) wurde die hemmende Aktivität des Samples bestimmt als jene Konzentration, welche 50 % der Enzymaktivität inhibiert (IC 50). Als Referenzsubstanz wurde Koji-Säure verwendet.
Untersuchuchung der Tyrosinase in einer kultivierten HM3KO-Melanom-Zellen-Linie
HM3KO-Zell-Linien wurden in modifiziertem Eagles-Medium, welches mit 10% fötalem Kälberserum supplementiert wurde, kultiviert. Die Aktivität der Tyrosinase wurde unter Nutzung von kultivierten HM3KO-Melanom-Zellen-Homogenat mithilfe einer leicht modifizierten Methode nach Pomerantz untersucht. Zell-Pellets wurden für einen kurzen Zeitraum in einem Ultraschallbad behandelt, welches 0,1 mM Natriumphosphatpuffer (pH 6,8) mit 0,1 mM Phenylmethylsulfonylfluorid (PMSF) und 1% Triton X-100 enthielt. Nach einer einstündigen Inkubationsphase in Eis wurden 25 mg Lösungsprotein für eine Enzym-Untersuchung eingesetzt. Jede Konzentration der Verbindungen wurden für eine Stunde bei 37 °C in 0,5 ml einer Reaktionsmixtur aus 0,25 mM Tyrosin, 5mCi[3H]Tyrosin, 0,25 mM l-3,4-Dihydroxyphenylalanin (DOPA) und 0,1 mM PMSF in 0,1 M Natriumphosphatpuffer (pH 6,8) inkubiert.
Auch hier wurde die hemmende Aktivität des Samples bestimmt als jene Konzentration, welche 50 % der Enzym-Aktivität hemmt (IC 50). Als Referenzsubstanz wurde Koji-Säure verwendet. 85% des Extraktes aus getrockneten Blättern des Maulbeerbaums hemmte die Tyrosinase-Aktivität.
In der zugrundeliegenden Studie konnte gezeigt werden, dass die hemmenden Effekte eines Extraktes aus getrockneten Blättern des Maulbeerbaums dessen Bestandteilen Mulberroside F, Moracin M-6 und 39-di-O-b-D-Glucopyranosid zugeordnet werden kann. Die Hyperoxid-Fänger-Eigenschaften und die hemmende Wirkung auf die Dopa-Oxidase-Aktivität der Tyrosinase der jeweiligen Verbindung wurden ausgewertet, um die depigmentierenden Wirkstoffe festzustellen.
Eine Verbindung mit einer Konzentration von 100mg/ml erzeugte eine 51,6%ige Hemmung der Dopa-Oxidase-Aktivität der Pilz-Tyrosinase, bei welcher 50% Inhibition (IC 50) bei einer Konzentration von 0,29 mg/ml nachgewiesen wurden. Diese Verbindung erwies sich als ungefähr 4,5 mal potenter als Koji-Säure hinsichtlich ihres hemmenden Effektes auf die Enzym-Aktivität.
In den Untersuchungen der zugrundeliegenden Studie wurde außerdem gezeigt, dass der hemmende Effekt von natürlich isoliertem Mulberrosid F auf die Aktivität der Tyrosinase stärker war als der von Koji-Säure. Bemerkenswerterweise zeigte der Wirkstoff nicht nur eine Inhibition der Tyrosinase-Aktivität, sondern auch Hyperoxid-Fänger-Eigenschaften und hemmte die Melaninproduktion in kultivierten Melan-A-Zellen.
Fazit
Die Ergebnisse der zugrundeliegende Studie untermauern den bedeutenden Wert von Extrakt aus getrockneten Blättern des Maulbeerbaums bei der Behandlung oder der Vorbeugung von Hyperpigmentation der Haut.
Zugrundeliegende Studie:
Lee, S. H.et al.: Mulberroside F Isolated from the Leaves of Morus alba Inhibits Melanin Biosynthesis; in: Biol. Pharm. Bull. 25(8), 1045—1048 (2002)